La prueba de ADN mitocondrial (ADNmt) se usa para determinar si dos o más individuos están relacionados a través de sus padres (a través de la línea materna/femenina). Esta prueba es usada a menudo para proporcionar evidencia adicional en casos complejos de maternidad donde la presunta madre no está disponible para las pruebas. Los resultados de estas pruebas pueden utilizarse también para confirmar a los parientes biológicos de un adoptado.

La prueba de ADN Mitocondrial es heredado a través de la línea maternal –es decir, todos los hijos e hijas heredan el ADNmt de su madre. Sin embargo, solamente las hijas pueden transmitir el ADNmt de su madre a sus vástagos.

La prueba deADN Mitocondrial está compuesto de una cadena de moléculas de ADN en un orden particular, o secuencia. En la prueba de ADN mitocondrial, un pequeño segmento del ADNmt es secuenciado (el orden de las moléculas de ADN es determinado) y las secuencias del ADNmt de cada individuo son comparadas para ver si podrían venir de la misma línea materna. Todo el que tenga la misma línea maternal tendrá similar secuencia de ADNmt.